atp荧光检测仪快速检测活菌数的方法研究及应用

        atp荧光检测仪快速检测活菌数的方法研究及应用，细菌总数是国内外公认的饮用水、食品、医院及其科学研究过程中所涉及样品的卫生细菌学指标，其测定技术在食品卫生安全及疾病防治、环境监测中广泛应用。随着微生物资源开发与利用，所需检测微生物指标的样品范围和数量不断扩大。目前细菌总数检测方法主要有传统的平板菌落计数法[1]和比浊法，其操作步骤复杂，而且需培养24−48 h方能出结果，且因培养基中营养物质有限和好氧培养条件的特点，仅有一些细菌能生长而被检测到，其结果不能代表真正的细菌总数。近年来开发的新型检测技术以缩短检测时间、简化操作、降低检测成本、提高检测效率等优势而被广泛关注[2]，如高光谱技术[3-5]、荧光定量PCR技术[6-7]、ATP生物发光技术[8-10]、流式细胞计数法[11-12]、3M测试片快速分析技术[13]、MTT法快速检测技术[14-15]、TTC显色法[16]、集合酶联反应技术[17-18]、介电谱技术[19-20]等。然而这些新型方法大多是通过实验室大型设备实现的，设备价格高，检测条件严格，不易实现现场快速检测。开发快速、便捷、灵敏的细菌总数检测方法具有重大的现实意义。

        Calcein UltraGreen™ AM是一种疏水性化合物，可轻松通过活细胞膜，荧光染料的AM基团被活细胞中存在的细胞酯酶水解切断，在细胞内产生强荧光特性，该反应为不可逆反应，结合成功后，即使细胞死亡该荧光特性也会一直存在。然而酯酶活性与活细胞数成正比，因此，活细胞与由Calcein UltraGreen™ AM催化酯酶水解产生的荧光强度直接相关。该荧光染料的光谱特性为激发波长496 nm、发射波长524 nm，染色活动物细胞的条件为染料浓度在1−10 μmol/L、37 ℃下反应5−10 min，可以将浓度为106−108 cells/mL的活动物细胞准确染色。由于该染色条件是用于染色动物细胞，目前尚未有文献报道过应用该染料检测活菌数，因此需要建立其针对微生物细胞的探针检测条件。

        本研究基于新型荧光染料Calcein UltraGreen™ AM的荧光特性及其在活细菌细胞内稳定的反应特性，并结合小型便捷式荧光仪，以开发兼有现场快速、便捷、灵敏的细菌总数检测方法为目的，研究并建立一种活细菌总数快速荧光检测法，且将方法应用于实际样品细菌总数的测定。atp荧光检测仪有效的检测食品中的微生物污染状况，降低了食品安全事故的发生，仪器能够在市场、家庭、食堂餐厅等范畴普遍应用，仪器体积小，反响灵活度高，是食品安全检测的便利仪器。